因是前期實驗,因此隻需要用直接計數法即可。
然後,即便是直接計數法,仍需要一定的實驗步驟,才能相對客觀反應——
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先固定好細胞,不再讓其移動。
用鑷子小心取出小室,吸乾上室培養基,用棉簽輕輕擦拭Matrigel和上室內的細胞。取新的24孔板加入4%多聚甲醛600μL,將小室放入後固定20-30min。
然後再進行細胞染色!
取出小室,吸乾上室固定液,移到預先加入約800μl 1%-2%結晶紫的孔中染液的孔中,染色15-30min。除去未與細胞結合的結晶紫,用棉簽輕輕擦拭小室的上側,將非特異性結合於小室上表麵的染料擦掉,以便後續鏡檢計數……
這一步,方子業非常期待,因為不管是別人的細胞實驗,還是自己的,隻要自己發現了,而且參與了實驗,肯定就有學識點的收益!
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