空去動物實驗室看看,我們有新的進展。”唐順提議。
“現在就可以!”楊平說。
散會後,楊平站在動物實驗室的更衣室裡,一件一件地穿防護裝備。
隔離衣、口罩、手套、護目鏡。他穿得很慢,每一件都檢查兩遍,像上手術台前刷手那樣認真。今天要看的東西,是整個修複程序假說最關鍵的一塊拚圖。
動物實驗室的門在他身後關閉,發出氣密鎖特有的“嘶……”聲。
唐順已經在裡麵,他站在飼養架前,手裡拿著記錄本,正在看籠子裡的小鼠。聽到聲響轉過頭,口罩上方的眼睛彎了一下。
“教授,都好了。”
楊平走過去,低頭看籠子裡的小鼠。一隻成年C57BL/6小鼠,黑色毛,眼睛亮亮的,在籠子裡跑來跑去,完全不知道自己身上帶著整個實驗室的期望。
“哪一組?”楊平問。
“第七組,AAV-未知因子組。”唐順翻開記錄本,一條一條念,“AAV2/9血清型,CBA啟動子,全基因組測序驗證整合位點特異性插入。滴度1.2x10^12 vg/ml,注射體積1.5微升,注射位點脊髓T9節段背角。”
楊平點了點頭。這些參數他背得下來,但他還是讓唐順念了一遍。實驗數據麵前,記憶不可靠,記錄才可靠。
“損傷模型呢?”
“鉗夾損傷,力度15克,時間30秒。術後第1、3、7、14、28天分別采集樣本。”
楊平蹲下來,把籠子拉到眼前,隔著有機玻璃看那隻小鼠。它正在用前爪洗臉,動作飛快,像一台精密的儀器在自我校準。
“走路姿勢正常。”他說。
“是,”唐順說,“所有AAV-未知因子組的小鼠,從術後第7天開始,後肢運動功能就顯著優於對照組。第14天的時候,BBB評分已經接近正常值的80%。對照組隻有35%。”
楊平站起來,走向操作台。台麵上放著今天要處理的樣本,五個時間點、四個實驗組、每組八隻小鼠,一百六十個脊髓組織樣本。每一個都被仔細包埋在OCT裡,凍成小方塊,整整齊齊排列在-80度的冰箱裡。
“先看第7天的。”楊平說。
唐順從冰箱裡取出第7天的樣本盒,用鑷子夾出一個。編號7-AAV-03。他把樣本放到冰凍切片機的樣品頭上,旋緊,開始切片。
切片機的聲音很低,嗡嗡的,像蜜蜂在遠處飛。楊平站在旁邊,看著唐順一刀一刀切。每一刀下去,樣品頭上就卷起一片透明的組織切片,薄得像蟬翼,在燈光下幾乎看不見。
“厚度?”楊平問。
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唐順說,“12微米,連續切片,每張間隔240微米,每個脊髓取8個切麵。”
切片收集在防脫玻片上,一張一張,像收集郵票。收完第7天的所有樣本,唐順把玻片放進染色架,開始做免疫熒光染色。
一抗、二抗、封閉液、洗滌液。每一步都按標準操作規程來,時間精確到秒,溫度控製在4度。楊平沒插手,就站在旁邊看。唐順的操作很標準,移液、加樣、孵育、洗滌,每個動作都乾淨利落,沒有多餘手勢,沒有猶豫。
“一抗孵育多久?”楊平問。
“過夜。”唐順看了看手表,“明天早上八點加二抗。”
“好,那先看別的。”
唐順把染色的玻片放進4度冰箱,又從另一個冰箱裡取出另一組樣本。原位雜交的樣本,檢測未知因子的mRNA表達。
“這個我來。”楊平說。
唐順愣了一下,讓開位置。
楊平走到操作台前,戴新手套。他用鑷子夾起一張載玻片,上麵貼著一個脊髓的橫切麵,組織薄得透明,在燈光下呈淡淡的乳白色。
他拿起探針,用移液器吸取20微升,滴在組織上。蓋蓋玻片,放進雜交儀,設定溫度65度,時間16小時。
“明天早上一起看。”他說。
唐順在旁邊點頭,在記錄本上寫:“原位雜交,啟動。”
一個小時後,兩個人走出動物房。
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