有退縮，繼續說道：“陛下以仁孝治國，若因修道而傷了百姓之心，豈非得不償失？況且，天道好生，濫傷無辜，恐遭天譴。”
這是張皇後第一次當眾忤逆世宗的意願。世宗勃然大怒，指著她罵道：“你竟敢管到朕的修道之事上？陳皇後的下場，你忘了嗎？”張皇後被他罵得渾身發抖，卻依舊挺直了脊背：“臣妾不敢忘，但臣妾是皇後，不僅要掌管後宮，更要為陛下的聖名著想。若陛下執意如此，臣妾唯有以死相諫。”世宗見她態度堅決，氣得拂袖而去，當晚便宿在了寵妃方妃的宮中。
這次衝突，成了張皇後失寵的開端。世宗覺得，曾經溫順體貼的皇後，如今也變得和陳皇後一樣“驕縱多事”，對她的好感漸漸消失。而方妃等人則趁機在世宗麵前詆毀張皇後，說她“嫉妒聖寵，乾涉修道”。世宗本就多疑，聽得多了，便越發覺得張皇後心懷不軌。
嘉靖十五年春，世宗的生母蔣太後病重，張皇後親自入宮侍疾，衣不解帶地照顧了半個多月。蔣太後對這個兒媳十分滿意，拉著她的手說：“有你在，我便放心了。”可這份婆媳情誼，卻沒能挽回世宗的心。蔣太後去世後，世宗將更多的精力投入到修道中，甚至在宮中修建了一座“元極殿”，專門用於煉丹祭祀，常常一連數日不處理朝政，也不踏入坤寧宮一步。
張皇後失寵後，後宮的形勢變得愈發複雜。方妃、鄭妃等人爭寵愈演愈烈，常常明爭暗鬥，甚至將矛盾引到她的頭上。有一次，方妃宮中的一名宮女偷了皇後的一支鳳釵，方妃不僅不懲治宮女，反而倒打一耙，說宮女是受了皇後的指使，想陷害她。世宗不分青紅皂白，便召來張皇後斥責了一頓，還下令削減了坤寧宮的份例。張皇後有苦難言，隻能默默忍受。
就在張皇後的處境愈發艱難時，一件意想不到的事情發生了。嘉靖十六年夏，世宗在元極殿煉丹時，不慎被丹爐中的火星燙傷了手臂。消息傳到坤寧宮，張皇後不顧眾人的勸阻，親自帶著金瘡藥趕往元極殿。當時世宗正因燙傷而煩躁不安，見她來了，臉色依舊冷淡：“皇後不在坤寧宮待著，來這裡做什麼？”張皇後沒有理會他的冷漠，走上前小心翼翼地為他處理傷口，輕聲說道：“陛下的身體，關乎天下蒼生，怎能不慎？臣妾知道陛下癡迷修道，但煉丹之事，本就凶險，還請陛下以龍體為重。”
或許是她的真誠打動了世宗，或許是傷口的疼痛讓他冷靜了下來，世宗看著她額頭上的汗珠，沉默了許久，最終說道：“你先回去吧，朕知道了。”這次探望之後，世宗對張皇後的態度略有緩和，偶爾也會來坤寧宮歇宿。張皇後以為自己的隱忍和真心終於有了回報，卻不知道，一場更大的危機正在悄然醞釀。
嘉靖十八年，世宗決定南巡，祭拜顯陵（他生父興獻王的陵墓）。臨行前，他任命張皇後留守北京，掌管後宮及京畿防務。張皇後深知責任重大，臨行前反複叮囑世宗注意安全，又將後宮事務安排得井井有條。世宗表麵上點頭應允，心中卻對她的“管束”愈發不滿。南巡途中，世宗偶遇一名道士，道士對他說：“陛下乃真命天子，隻需潛心修道，便可成仙。隻是宮中皇後，命格強硬，恐會妨礙陛下修行。”世宗本就對張皇後心存芥蒂，聽了道士的話，更是深信不疑。
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南巡歸來後，世宗對張皇後的態度急轉直下。他不僅不再踏入坤寧宮，還常常在朝堂上暗示張皇後“乾預朝政”。張皇後察覺到了危險，卻不知道該如何應對。她試圖再次勸諫世宗，卻被世宗以“皇後失德”為由，下令禁足坤寧宮。禁足期間，方妃等人趁機落井下石，捏造了許多罪名陷害張皇後，說她與宮外官員有染，還詛咒皇帝早日歸天。
嘉靖二十年正月，世宗以“皇後無子，且心懷不軌”為由，下旨廢黜張皇後的皇後之位，將她打入冷宮。詔書宣讀的那一刻，張皇後正在坤寧宮的窗前刺繡，聽到“廢黜”二字，她手中的繡花針掉落在地，刺破了指尖。鮮血滴在繡了一半的鳳凰圖上，像一朵淒豔的紅梅。她沒有哭鬨，隻是平靜地對宣旨的內侍說：“請轉告陛下，臣妾從未負他，也從未負大明。”
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